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紫外分光光度計(jì)如何避免吸光值漂移
發(fā)布日期：2017-03-06 瀏覽次數(shù)：1795
紫外分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。核酸的定量是紫外分光光度計(jì)使用頻率高的功能。
紫外分光光度計(jì)讀數(shù)不穩(wěn)定可能是用戶(hù)頭痛的問(wèn)題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和度。
·核酸本身物化性質(zhì)
溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等，在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液（如TE）可大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下，才能得到的檢測(cè)結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測(cè)誤差。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)存在自身吸收，為了確保準(zhǔn)確測(cè)量，請(qǐng)使用與懸浮或洗脫樣品時(shí)相同的緩沖液。
·樣品的稀釋濃度
同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值好在0.1-1.5 A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過(guò)低，或者過(guò)高（超過(guò)紫外分光光度計(jì)的測(cè)試范圍）。
·操作因素
如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值；混合液不能存在氣泡，空白液無(wú)懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的小體積等多個(gè)操作事項(xiàng)。
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